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艾基金:用于癌癥給藥的細(xì)胞/組織重組脂質(zhì)納米粒子

更新時(shí)間:2023-08-22   點(diǎn)擊次數(shù):2157次

介紹:

納米藥物是設(shè)計(jì)更好的藥物遞送系統(tǒng)(DDS)的一種有前景的方法,而基于細(xì)胞/組織的脂質(zhì)載體的開發(fā)是一種有前景的策略。在本研究中,作者提出了重組脂質(zhì)納米顆粒(rLNPs)的概念,并提供了一種簡(jiǎn)單的制備方法。結(jié)果表明,從細(xì)胞(小鼠乳腺癌癥細(xì)胞系,4T1)和組織(小鼠肝組織)中制備超小(~20nm)rLNP高度可再生。作為一個(gè)選定的模型平臺(tái),來源于小鼠肝組織的rLNP可以進(jìn)一步用成像分子(吲哚菁綠和xiang豆素6)標(biāo)記,并用靶向配體(生物素)修飾。此外,rLNPs被證明具有高度的生物相容性,能夠負(fù)載各種藥物,如鹽酸阿霉素(Dox)和姜黃素(Cur)。最重要的是,Dox負(fù)載的rLNPs(rLNP/Dox)在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出良好的抗癌性能。因此,rLNPs可能是構(gòu)建不同DDS和治療多種疾病的潛在多功能載體。

制備:

材料:

鹽酸阿霉素Dox、姜黃素(Cur)、xiang豆素(C6)、吲哚菁綠(IGG)、甲基噻唑四氮唑(MTT)。DSPE-PEG2000-Biotin(艾偉拓(上海)醫(yī)藥科技有限公司),其他沒有具體說明的化學(xué)品和試劑都是從阿拉丁購買,并且是分析級(jí)的。

艾偉拓AVT在售的DSPE-PEG2000-Biotin來自日本丘比的蛋黃卵磷脂,并且是以蛋黃粉為原料通過先*工藝提取、純化的磷脂混合物。

選擇好的磷脂產(chǎn)品可以來艾偉拓(上海)醫(yī)藥科技有限公司看一看,這是一家專營(yíng)磷脂類gao端藥用輔料的科技公司,公司旗下產(chǎn)品豐富,有著技術(shù)專家的專業(yè)支持,能夠及時(shí)的解決客戶問題,助力客戶價(jià)值的提升。

rLNPs的制備:

遵循先前報(bào)道的方案,從細(xì)胞和組織中提取全脂,并進(jìn)行修飾。簡(jiǎn)而言之,將100 mg的新鮮組織(或5x107的細(xì)胞)切成片,裝入500 µL 含有75%甲醇的玻璃均質(zhì)器中。在0℃下研磨約50次后,將混合物轉(zhuǎn)移到含有另1 mL甲基叔丁基醚(MTBE)的棕色試管中,將試管放入搖床中1小時(shí),以便充分提取脂質(zhì),然后,向管中加入250 µL純水,靜置10min進(jìn)行相分離,然后在0℃下,15000xg離心15min,將含有濃縮脂質(zhì)的上部MTBE相轉(zhuǎn)移到另一個(gè)新的棕色試管中,并使用吹氮儀器進(jìn)行干燥。

將得到的脂質(zhì)溶解在乙醇中,達(dá)到zhi定的濃度。然后,根據(jù)文獻(xiàn)作者之前的研究,采用溶劑擴(kuò)散法,將乙醇溶液在攪拌(500rpm),以0.1 mL/s的恒定速率,通過注射器注入純水(體積比為:1:9)。

關(guān)于材料和方法的所有詳細(xì)信息請(qǐng)參考support information。

結(jié)果:

 

圖片2.png

圖1:使用從4T1細(xì)胞和小鼠肝組織提取的脂質(zhì)制備的rLNP的尺寸分布(A,B)和形態(tài)觀察(C,D)。比例尺:200 nm。

 

圖片3.png

 

圖2:4T1細(xì)胞中,未修飾(上)和生物素修飾(下)的C6標(biāo)記rLNP的時(shí)間依賴性細(xì)胞攝取譜。比例尺:50μm

 

 

圖片4.png

圖3:rLNPs的生物相容性測(cè)定。(A)用不同濃度的rLNP處理1小時(shí)后2%紅細(xì)胞的溶血。插入的圖像顯示不同組的上清液。(B)小鼠的體重變化每隔一天靜脈注射rLNPs(100mg/kg),持續(xù)14天。數(shù)據(jù)顯示為三個(gè)獨(dú)立結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。(C)從給藥結(jié)束時(shí)從受體獲得的主要器官制備的HE組織病理學(xué)切片。比例尺:100μm。

 

 

 

圖4:rLNPs的體內(nèi)腫瘤積聚測(cè)定。將游離ICG(左)和ICG標(biāo)記的rLNP(右)靜脈注射到原位4T1荷瘤小鼠中,并通過實(shí)時(shí)成像觀察受試者在6(A)、24(B)和48小時(shí)(C)時(shí)的ICG信號(hào)分布。在注射后48小時(shí),切除一名受試者的主要器官和腫瘤組織進(jìn)行離體成像(D)。(E) 靜脈內(nèi)給予游離Dox和rLNP/Dox(Dox劑量:5mg/kg)后4T1荷瘤小鼠的時(shí)間依賴性組織/血漿Dox濃度。Dox濃度分別表示為組織的μg/g組織和血漿的μg/mL。數(shù)據(jù)顯示為三個(gè)獨(dú)立結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差*P<0.05

 

圖6:rLNP/Dox的體外抗癌性能。(A) 孵育24小時(shí)后,游離Dox和rLNP/Dox對(duì)4T1細(xì)胞的濃度依賴性細(xì)胞毒性。數(shù)據(jù)顯示為三個(gè)獨(dú)立結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。(B) MCTS與游離Dox或rLNP/Dox(Dox濃度:1μg/mL)孵育4天后的圖像。比例尺:500μm。左側(cè)的定量結(jié)果表示MCTS的相應(yīng)體積

圖片7.png

 

圖7:rLNP/Dox的體內(nèi)抗癌性能。(A) 腫瘤體積變化和(B)HE和Ki67染色后的離體腫瘤切片的代表性圖像。比例尺:100μm*P<0.05。

結(jié)論:

總之,在本研究中,作者提出了rLNPs的概念和制備方法,并展示了其作為多功能藥物遞送載體的潛力。它們的優(yōu)點(diǎn)包括:(1)從細(xì)胞和組織制備的重復(fù)性高;(2) 用熒光分子進(jìn)行柔性標(biāo)記,并對(duì)靶向配體和可能的其他功能部分進(jìn)行修飾;(3) 高生物相容性;(4) 能夠裝載各種分子/藥物;以及(5)作為藥物載體具有良好的體外和體內(nèi)抗癌性能,這可以通過負(fù)載其他種類的藥物進(jìn)一步擴(kuò)展到治療其他疾病。在未來的工作中,作者將重點(diǎn)關(guān)注以下幾個(gè)方面:(1)將rLNPs的應(yīng)用擴(kuò)展到不同的藥物和其他疾病模型;(2) 探討rLNPs是否具有細(xì)胞/組織特異性功能;和(3)闡明是否可以使用rLNP實(shí)現(xiàn)細(xì)胞/組織訓(xùn)練,因?yàn)樗鼈儼阁w細(xì)胞/組織的脂質(zhì)組學(xué)。

 

 

 

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